CO2培養(yǎng)箱中的溫度控制:研究可靠性和重復性的關(guān)鍵

控制可能影響實驗,或**少更好地定義實驗的變量,允許科學家研究被問及的問題,以及提供對所接收的答案的進一步信心。 具有可定義的過程路徑的能力在分析結(jié)果時創(chuàng)建較少的變量。 的CO 2培養(yǎng)箱是一個刀具科學家為了提供用于細胞生長受控的環(huán)境依賴。

在CO 2 培養(yǎng)箱內(nèi)的條件,然而,可能會發(fā)生變化,從一個供應商到另一個,或者甚**從一個培養(yǎng)箱到另一個。 細胞生長的環(huán)境可能不總是被**佳地控制。 這可能會產(chǎn)生更多與結(jié)果的完整性有關(guān)的問題,**終會導致科學家所尋求的問題的答案。

這樣,CO 2 孵化器是一個重要組成部分,以**科學實驗中所用的方法,并且應被緩解,或更好的理解,在為了提高實驗的可靠性和可重復性的風險。

溫度控制的重要性

溫度控制是用于**佳細胞生長的特別重要的環(huán)境參數(shù),因為培養(yǎng)物中的生長或反應可能受到整個內(nèi)部室溫度的微妙變化(或變化的波動)的影響。 蛋白質(zhì)是否表達或不表達可以取決于幾度的差異。 不能提供對溫度的精確和穩(wěn)定的控制可以導致不同的或異常的生長和生產(chǎn)結(jié)果(例如,基因插入實驗中的轉(zhuǎn)染速率可以受溫度變化的影響;當?shù)鞍踪|(zhì)從表達轉(zhuǎn)染片段的細菌菌落以較低的速率產(chǎn)生)。 這可能導致研究人員走錯路徑和/或影響結(jié)果的可重復性或可靠性。

此外,CO 2 培養(yǎng)箱內(nèi)控制的環(huán)境參數(shù)(CO 2,相對濕度和溫度)定義為細胞生長的條件,但控制技術(shù)并不總是占事實每個參數(shù)將影響其他。 例如,溫度和系統(tǒng)的提供溫度控制能力影響的相對濕度(RH)和CO 2水平也影響的實驗需要的條件。 關(guān)于RH,如果孵化器內(nèi)部的溫度沒有適當?shù)乇3郑瑒t懸浮在蒸氣中的水的量將變化。 并且,隨著溫度波動 - 特別是當其冷卻時 - 水分將積聚在具有低于露點的溫度的表面上。 這種冷凝是不良環(huán)境控制的標志,這是一個未定義的變量,將使任何實驗更不可靠和可重復。 更不要說它會引起系統(tǒng)中更多的未知物或潛在的污染物。

在溫度波動也會影響CO 2濃度。 二氧化碳是一種酸性分子。 培養(yǎng)箱內(nèi)增加的 CO 2將導致一個更小的中性環(huán)境,這將反過來影響暴露給它的培養(yǎng)物。 如果一個孵化器內(nèi)的溫度不能精確地控制或維持,在CO 2的含量的增加可以是有害的。 隨著溫度的升高,所以確實的 CO 2中膨脹的空氣的量和酸度培養(yǎng)物可以暴露于的水平。 此外,CO2是可溶于水。 這將提供將在室周圍循環(huán)的酸性水蒸汽。 溫度變化會在腔室中產(chǎn)生影響的 CO 2溶解度的速率。 隨著溫度的斜坡上升并帶回了下來, 二氧化碳分子被吸收在潮濕的環(huán)境和孵化器內(nèi)的空氣質(zhì)量進行冷卻冷凝流下通過進入水源,在表面上。這樣,溶解的 CO 2的增加和它創(chuàng)建的酸化水可以導致惡劣的環(huán)境,可以破壞取決于受控環(huán)境(例如,37℃,5%CO 2,95的組織培養(yǎng)物或其他實驗%RH)和對于生長的一致的pH為7.4。

現(xiàn)有溫度控制技術(shù)的問題

溫度穩(wěn)定性差

為細胞生長提供受控環(huán)境的概念不是新的。 控制水平或定義可接受的控制水平對于任何實驗總是挑戰(zhàn)。 許多研究人員都敏銳地意識到,在他們的實驗室中使用的CO 2孵化器都在溫度變化整個室內(nèi),從貨架貨架及前后。 為了克服這一點,一些供應商提供操作指令,指示維持其指定的環(huán)境條件和溫度控制(穩(wěn)定性,均勻性,準確性)的**方式是每天打開孵化器門數(shù)次。 巧合的是,同一家供應商解釋說,這樣做有助于減少培養(yǎng)箱內(nèi)表面積水。 但是,除了在溫度超支的風險(這反過來又影響濕度和CO 2),這同一個指令將增加引入到實驗的完整性另一個威脅的風險-污染。

此外,實驗室必須經(jīng)常開發(fā)自己的程序,以控制CO 2 的 培養(yǎng)箱功能不足的影響,經(jīng)常采用的協(xié)議和變通以適合,它是在所使用的實驗,如果在CO 2 培養(yǎng)箱 中的溫度并不一致,并且如果系統(tǒng)不能通過校準和精確的控制來維持環(huán)境,則從實驗室使用中恢復的能力是一項艱巨的任務。 例如,在大量使用期間,儀器必須補償門打開和關(guān)閉,這可能導致加熱元件的過沖,試圖快速恢復溫度而不考慮快速的溫度變化。 這種對溫度恢復的積極方法可以使培養(yǎng)物暴露于可以改變結(jié)果或途徑的條件。 在恢復期間溫度的均勻控制將提供更穩(wěn)定,可預測的條件。 這是理解,但找到正確的儀器是困難的。 限制訪問可以保持條件,但這在大多數(shù)實驗室是不現(xiàn)實的。

“甜點” - 溫度均勻性差

二氧化碳 培養(yǎng)箱室內(nèi)的溫度差均勻性技術(shù)的一些系統(tǒng)中又經(jīng)歷了一個垮臺。 孵化器利用的加熱元件的數(shù)量以及它們在內(nèi)部室內(nèi)的放置可導致孵化器的某些區(qū)域內(nèi)的變化,導致整個系統(tǒng)中的冷點和加熱點。 許多研究人員已經(jīng)學會接受這種限制,并且已經(jīng)通過依靠在腔室內(nèi)的感覺更一致或可靠的條件被遞送的**喜歡的點(通常被稱為“甜點”)來適應這種限制。 這是許多二氧化碳 培養(yǎng)箱內(nèi)發(fā)現(xiàn)一個共同的特點。 然而,這使得不可能有效地使用孵化器的整個空間,犧牲他可用于研究人員的可用工作空間,并且**終實現(xiàn)其實驗室的生產(chǎn)力。

這當然應該購買新的二氧化碳 培養(yǎng)箱之前評估。 受控環(huán)境中的工作空間不應該是每個實驗室必須分析的條件的拼湊,以合理地確保可靠和可重復的結(jié)果。 更均勻的溫度可以**大限度地利用可用的空間,以及一個較好的濕潤環(huán)境,這將帶來更準確的 CO2水平和合適的pH值。 此外,這還將有助于更好地控制板和燒瓶上的冷凝和水收集,因為溫度不是恒定波動的。

二氧化碳培養(yǎng)箱控制技術(shù)堅持要求

為了彌補這些穩(wěn)定性和均勻性問題,尋找可以通過考慮用戶的習慣并相應地補償這些模式來預測大量使用的時間的控制算法。 尋找封閉的反饋回路控制器,其被編程以適應實驗室中的用戶及其打開和關(guān)閉培養(yǎng)箱的實踐,而不是假設(shè)所有實驗室具有相同的用戶模式的真實比較基礎(chǔ)。 此外,尋找單向氣流有助于在整個腔室提供一致的溫度。 **后,足夠數(shù)量的加熱元件以及甚**在內(nèi)部腔室內(nèi)的放置將有助于保持穩(wěn)定性并減少從擱架到擱架和從腔室的前部到背部的溫度變化。

一些供應商已經(jīng)開發(fā)了設(shè)計用于解決這些問題和更好地控制孵化器內(nèi)的環(huán)境的控制算法。 然而,有些只考慮兩個變量的控制-溫度和CO 2。 這種方法不考慮其他變量的影響或缺乏控制:相對濕度。 這對于為細胞生長和污染控制提供**佳環(huán)境**關(guān)重要。 當室內(nèi)溫度升高時,空氣的膨脹將允許更多的水蒸氣被保持,并且RH將由于該容量改變等式而增加。 任何溫度下降將導致已經(jīng)保持的多余水分從空氣空間中降落并冷凝在較冷的表面(例如,培養(yǎng)皿,測定板或擱板)上。

孵化器內(nèi)的環(huán)境是復雜的,所有因素以微妙和公開的方式相互影響。 不能精確地控制該環(huán)境導致污染的可能性增加,不可靠和不可重復的結(jié)果,不一致的環(huán)境參數(shù)以及總是滿足某些條件并且可以用于定義實驗的不正確的信念。 創(chuàng)建調(diào)節(jié)和預測存在的加熱元件的使用的算法產(chǎn)生更穩(wěn)定和均勻的溫度范圍,其流入穩(wěn)定和受控的濕度和具有適當pH的環(huán)境。 科學家應該評估溫度和每個對細胞生長**關(guān)重要的變量在他們當前的孵化器和他們正在考慮的任何新孵化器中的控制方式。